通过可光分裂的表面活性剂和自上而下的蛋白质组学实现内源性索兰班蛋白质形式的全面表征
Holden T Rogers1, David S Roberts1, Eli J Larson1
1Department of Chemistry, University of Wisconsin-Madison, Madison, Wisconsin 53706, United States.
Analytical chemistry
|August 22, 2023
概括
我们开发了一种新的自上而下的蛋白质组学方法来分析关键心脏蛋白质索兰班 (PLN). 这种方法成功地识别了PLN的各种翻译后修改 (PTM),揭示了心脏病的变化.
科学领域:
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 生物化学 生物化学
- 心血管生物学 心血管生物学
背景情况:
- 上向下质谱 (MS) 对于分析完整的蛋白质和翻译后修饰 (PTM) 非常重要.
- 膜蛋白对于细胞功能和药物向至关重要,但通过自上而下的MS进行分析是具有挑战性的,因为水性和低丰度.
- 胺 (PLN) 是一种关键的肉质细胞网膜膜蛋白调节心脏收缩,多种PTM影响心脏功能和疾病.
研究的目的:
- 开发一种快速而强大的自上而下的蛋白质组学方法,用于从心脏组织中提取和表征内源性 PLN.
- 综合分析人类心脏PLN的序列和组合PTM.
- 为了研究心脏病中的PLN PTM.
主要方法:
- 使用可光分裂的阳离子表面活性剂 (Azo) 来有效提取内源性PLN.
- 采用了双向的自上而下的MS策略:在线逆相液态染色体协同MS (LC-MS/MS) 和直接输注超高分辨率里埃变态离子环子子共振MS (FT-ICR MS).
- 进行了MS/MS分析,以确定特定站点的PTM定位.
主要成果:
- 成功描述了内源性人类心脏PLN的序列和组合PTM.
- 确定了Ser16和Thr17的特定位点酸化和PLN的Cys36的S-palmitoylation.
- 在患有缺血性心肌病的人类心力衰竭中观察到PLN酸化的显著降低.
结论:
- 开发了一种精简的自上而下的向蛋白质组学方法,用于全面描述PLN.
- 提供了关于心脏 PLN 的特定站点 PTM 的新见解.
- 证明了该方法在理解 PLN 在心脏收缩性和疾病发病过程中的作用方面的实用性.
