功能性3D球形细胞培养的半自动表型分析

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学

背景情况:

• 三维细胞培养提供了比二维更具生理相关性的模型.
• 克林斯塔特化器提供了微重力环境,以增强3D细胞生长.
• 3D细胞培养分析的标准协议是有限的.

研究的目的:

• 介绍使用clinostat化器进行3D细胞培养的协议.
• 为了证明clinostat化对于球形形成和监测的优势.
• 建立3D细胞培养的表型和蛋白质组学分析的管道.

主要方法:

• 使用一个独立的clinostat化器进行3D细胞培养 (HepG2/C3A和THLE-3细胞系).
• 采用集成摄像头来监测球状体的生长,计数和测量.
• 在收集的球体上进行了蛋白质组学分析,没有试验.
• 开发了一种半自动化系统用于球体量化.

主要成果:

• 实现了具有低剪力和活跃营养扩散的高度可再生球体.
• 证明肝细胞需要3周的时间才能在3D培养中开发肝脏的特定功能.
• 展示了成功的蛋白质组学分析,用于监测肝脏表型,如呼吸链代谢和金属排毒.
• 验证了癌症和非癌症肝细胞细胞系的协议.

结论:

• 克林诺斯塔特化器协议促进了强大的3D细胞培养,监测和分析.
• 这种方法可以在3D模型上进行全面的表型特征和蛋白质组学研究.
• 该协议为推进肝脏生物学和疾病建模研究提供了一个有价值的工具箱.