在FTD中评估C9ORF72中介毒性的修饰剂的CRISPR干扰

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 遗传学 遗传学 是一个
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 治疗神经退行性疾病,如前性痴呆症 (FTD) 和肌缩性侧面硬化症 (ALS) 是有限的,需要更好的疾病模型.
• 传统的淘汰和转基因小鼠是耗时和昂贵的,阻碍了FTD/ALS遗传风险因素的研究.
• 与 TDP-43 功能障碍相关的 Stathmin-2 (STMN2) 降低调节,与 ALS 发病因相关,但其在 FTD 中的作用尚不清楚.

研究的目的:

• 为研究神经退行性疾病开发一种新的,快速且具有成本效益的CRISPR干扰 (CRISPRi) 敲击鼠标模型.
• 通过评估CRISPRi模型降低STHMIN-2 (STMN2) 表达的能力来验证CRISPRi模型,这是FTD/ALS的一个关键基因.
• 研究STMN2在FTD发病过程中的作用及其与C9ORF72相关病理学的相互作用.

主要方法:

• 使用催化死Cas9与转录抑制器融合生成了一个CRISPRi敲击鼠标模型.
• 使用单导向RNA来准和击败基因表达 *in vivo*.
• 通过准STMN2并表达C9ORF72基因中的扩展重复来验证模型,分析蛋白质水平和病理性包含.

主要成果:

• 在C9ORF72基因中成功证明了STMN2的同时淘汰和扩展重复的表达.
• 在家族性FTD病例中证实了STMN2蛋白的显著减少,这表明它参与FTD病变.
• 观察到STMN2的耗尽并没有影响二重复蛋白 (DPR),但显著减少了化TDP-43 (pTDP-43) 的含量.

结论:

• 新的CRISPRi小鼠模型提供了一种多功能和快速的基因沉默方法 *in vivo*.
• 这种模型对于单独或与其他神经退行性疾病模型结合理解基因功能是有价值的.
• 这些发现支持STMN2枯竭在FTD病变发生中的作用,并强调该模型对剖析复杂疾病机制的实用性.