一种通用方法,用于生成具有多种遗传背景的淘汰赛小鼠,使用囊胞电穿孔
Tomohiro Tamari1,2,3, Yoshihisa Ikeda1,4, Kento Morimoto5,6
1Model Generation & Breeding Service, The Jackson Laboratory Japan, Inc., 955 Kamibayashi, Ishioka, Ibaraki 315-0138, Japan.
Biology open
|August 25, 2023
概括
这项研究展示了一种新的,高效的方法,用于在各种菌株中使用CRISPR-Cas9囊电穿孔制造基因工程淘汰赛小鼠. 这一进步有助于在不同小鼠模型中研究基因功能和疾病.
科学领域:
- 遗传学和基因组学 遗传学和基因组学
- 哺乳动物遗传学 哺乳动物遗传学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 基因工程小鼠模型对于研究基因功能和疾病至关重要.
- 基因组编辑技术,如CRISPR-Cas9,可以快速生成这些模型.
- 齐戈特电穿孔为基因编辑提供了一种具有成本效益和劳动效率的方法.
研究的目的:
- 为了证明一种通用的紫电穿孔方法在多种同系菌株中产生淘汰小鼠的有效性.
- 建立一种多功能方法,用于为各种研究需求创建转基因小鼠模型.
主要方法:
- 使用体外受精与胚胎电穿孔相结合,引入CRISPR-Cas9复合体.
- 产生了创始人淘汰赛小鼠,针对八种常见的内生小鼠菌株中的特定基因.
- 采用长读测序来详细分析预期和非预期的突变等位基因.
主要成果:
- 在八个不同的杂交菌株中成功生成了淘汰赛小鼠的创始人.
- 通过测序识别了菌株之间的等位基频率 (有意与无意) 的变化.
- 确认生成的淘汰等位基因的生殖线传输成功.
结论:
- 泛化囊电穿孔方法是有效的创建淘汰赛小鼠在多个杂交菌株.
- 这种方法有助于建立突变小鼠,在不同的菌株中准相同的位点,以进行比较的表型.
- 通过多功能小鼠模型生成,为推进逆遗传学策略和人类疾病研究做出贡献.
