诱导多能干细胞的CGMP合规微流体转化用于CRISPR介导的基因组编辑
Laura R Bohrer1,2, Nicholas E Stone1,2, Allison T Wright1,2
1Institute for Vision Research, Carver College of Medicine, University of Iowa, Iowa City, IA, USA.
Stem cells (Dayton, Ohio)
|August 26, 2023
概括
基因编辑纠正患者干细胞中遗传的视网膜退化突变. 这种新的微流体方法推进了用于视力恢复的细胞疗法,提高了安全性并减少了监管障碍.
科学领域:
- 再生医学是一种再生医学.
- 遗传学 遗传学 是一个
- 眼科医生 眼科 眼科
背景情况:
- 遗传性视网膜退化导致光受体细胞死亡,导致失明.
- 基因疗法可能会阻止早期的进展,但需要细胞替代才能恢复视力.
- 根据当前的良好制造实践 (cGMP),将基因组编辑试剂有效地传递给干细胞至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的微流体平台,用于有效编辑患者衍生诱导多能干细胞 (iPSC) 的基因.
- 用CRISPR介导的同质依赖修复 (HDR) 来纠正导致疾病的NR2E3突变.
- 确保纠正的细胞适合潜在的移植.
主要方法:
- 使用Zephyr微流体传染平台 (CellFE) 进行试剂输送到iPSC.
- 使用内核酶试验进行量化CRISPR介导切割.
- 通过数字PCR和桑格测序确认了CRISPR校正;评估了细胞多能性,型和分化为视网膜器官.
主要成果:
- 通过使用cGMP兼容的方法,成功地纠正了患者衍生的iPSC中的NR2E3突变.
- 在纠正的细胞中没有表现出异常切割和多能性和正常型的保留.
- 已证实将其分化为适合移植的视网膜组织的潜力.
结论:
- 一个新型的微流体平台可以有效和安全地对iPSCs进行遗传性视网膜疾病的基因校正.
- 这种方法简化了制造,提高了细胞治疗的安全性,并减少了监管负担.
- 这项技术有望促进视力恢复的基于细胞的疗法.
