一个精简的指导RNA查系统用于基因组编辑在Sorghum双色球

科学领域:

• 植物生物技术 植物生物技术
• 分子生物学分子生物学
• 基因组学就是基因组学.

背景情况:

• CRISPR-Cas系统为有针对性的植物基因组编辑提供了强大的工具.
• 单向导RNAs (sgRNAs) 的可变效率阻碍了快速的作物改善.
• 需要有效的方法来评估植物中的sgRNA活性.

研究的目的:

• 开发和优化快速选系统,以评估在基因组编辑中的sgRNA效率.
• 为了比较不同CRISPR传递方法 (等离子体与RNP) 在原生体中.
• 为了建立最佳的条件为原生质的隔离和转染.

主要方法:

• 开发了一种短暂的原生质细胞转染试验,用于.
• 优化了 sorghum 植物的种植,以隔离高产原生质.
• 利用聚乙烯糖醇介导的转染来提供CRISPR组件.
• 通过针对性的深度测序分析了indel频率.

主要成果:

• 优化的种植条件产生了大量具有高效转染的可活原塑.
• 通过等离子体介导的输送达到了77.8%的内置频率,而RNP输送达到了18.5%.
• 整个查过程在16天内完成.

结论:

• 开发的sgRNA查系统是高效和简单的,用于的基因组编辑.
• 这种系统大大减少了作物改进所需的时间和资源.
• 预测sgRNA活动的早期预测加速了基因编辑果品种的发展.