相关实验视频
Updated: Jul 17, 2025
09:13
Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes
Published on: October 24, 2011
17.0K
在实验室中分析停滞的核糖体,使用普罗米辛的结合
MaKenzie R Scarpitti1,2,3, Michael G Kearse1,2,3
1The Biomedical Sciences Graduate Program, The Ohio State University, Columbus, OH, USA.
Bio-protocol
|August 28, 2023
概括
这项研究引入了一种新的,更快的方法来检测使用体外翻译系统在信使RNA (mRNA) 上停滞的核糖体. 该试验通过在胺素处理和糖离心后在颗粒中测量结合的mRNA来量化停滞的核糖体.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
- 遗传学 遗传学是一种遗传学.
背景情况:
- 核糖体可以在特定的信使RNA (mRNA) 上停滞,这是由于罕见的密码子,停滞动机或蛋白质相互作用.
- 停滞的核糖体可以阻碍翻译,并触发mRNA降解途径,如no-go mRNA衰变.
- 现有的检测核糖体滞后的方法,如核糖体足迹和多核糖体造型,在技术上要求很高,通量也很低.
研究的目的:
- 开发一个强大的,高通量检测试验室内停滞的核糖体检测协议.
- 为分析翻译延长动态提供一种简化方法.
- 为了能够评估影响核糖体停滞的因素,包括mRNA序列和蛋白质或小分子调节器.
主要方法:
- 使用哺乳动物的体外翻译溶解体系统与体外转录的记者mRNAs.
- 根据其分子重量,使用低速的糖子来颗粒核糖体.
- 杆化胺素导致活跃延长的核糖体与mRNA分离,而停滞的核糖体及其结合的mRNA仍然被颗粒化.
- 在颗粒中使用定量逆转录PCR (RT-qPCR) 进行量化的核糖体结合mRNA.
主要成果:
- 成功开发并优化了一种通过体外翻译来测试停滞的核糖体的检测协议.
- 证明了停滞不前的核糖体,不包含胺素,仍然与mRNA结合并被颗粒化.
- 该方法允许直接量化与核糖体结合的mRNA,表明核糖体停滞的程度.
- 该协议可适应测试各种延迟动机和翻译延长调节器.
结论:
- 本协议提供了一种简化和高效的方法,用于在体外检测和量化停滞的核糖体.
- 这种方法有助于研究翻译调节以及mRNA序列和转基因作用因子对核糖体动态的影响.
- 该试验可用于对影响翻译延长和核糖体停滞的化合物或基因修饰的高通量选.
