通过嵌入大肠杆菌并显示IgG结合域的聚合物微球来隔离抗体

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 生物材料科学 生物材料科学
• 蛋白质化学 蛋白质化学

背景情况:

• 抗体净化对于抗体药物质量和成本效益至关重要.
• 传统的方法,如蛋白质A染色学可能是昂贵的.
• 开发替代的,具有成本效益的净化策略是必不可少的.

研究的目的:

• 开发和评估一种新的抗体净化方法,使用在聚合物微球中固定化的工程大肠杆菌.
• 评估开发的微球矩阵的结合能力,动力学和可重复使用性,用于抗体分离.
• 将这种新方法的性能与现有的基于蛋白质A的净化进行比较.

主要方法:

• 显示ZZ蛋白 (Fc结合域) 的工程大肠杆菌被嵌入到聚乙烯醇/酸聚合物微球中.
• 研究了吸附异温和动力学,以了解IgG结合.
• 使用微球矩阵从小鼠骨中分离抗体.
• 在不同的pH值下评估了溶解效率和可重复使用性.

主要成果:

• ZZ蛋白成功地显示在大肠杆菌表面,并嵌入微球中.
• 微球矩阵显示IgG的最大吸附能力为35.74 mg/g.
• 吸附遵循兰格穆尔模型和伪第一阶动力学,在pH7.2时吸附最佳,在pH3.0时脱吸最佳.
• 经过五个周期,IgG吸附能力保持在80%以上.
• 从老鼠酸中进行净化,其纯度为86.7%,产量为83.5%.

结论:

• 嵌入工程化大肠杆菌的聚合物微球为抗体净化提供了有效和特定的矩阵.
• 这种方法提供了一种低成本,快速准备的替代蛋白质A矩阵,具有中等效率.
• 开发的系统显示出良好的可重复使用性和性能,可以从复杂的生物样本中分离抗体.