生物发光检测氨酸脱酶Sirtuin活动的生物发光检测

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 酶学 是一种酶学.

背景情况:

• 氨酸酸化调节蛋白质的功能,定位和相互作用.
• 锡尔图因是参与脱乙化的关键酶,维持细胞平衡.
• 异常的Sirtuin表达与包括癌症在内的各种病理有关,突出显示了活动测量的必要性.

研究的目的:

• 开发一种高灵敏度测试来测量Sirtuin活性.
• 为了能够准确量化Sirtuin介导的氨酸脱.
• 为了促进Sirtuins作为潜在的治疗点的探索.

主要方法:

• 开发"SIRTify",一种使用分离NanoLuc®光酶系统的新型试验.
• 该试验依赖于LgBiT和一个修饰的 (p86) 的补充.
• 氨酸对p86的乙化抑制了发光;氨酸介导的脱化恢复了它,产生了一种与活性成比例的信号.

主要成果:

• 在体外和体内,SIRTify准确地测量了Sirtuin的活性.
• 该试验证明了 lysine 修饰的 sirtuin 脱的特异性.
• 测量结果证实了已知的Sirtuin调节剂的影响,验证了测试的性能.

结论:

• SIRTify提供了一种敏感且可靠的方法来量化Sirtuin活性和lysine脱氧化动态.
• 这种测试可以帮助理解Sirtuin在细胞平衡和疾病中的作用.
• SIRTify可以适应监测其他翻译后修改.