使用GST融合系统在 prokaryotic 细胞中表达,净化和功能性 Teduglutide 的特征
Ali Akbar Alizadeh1, Saba Rasouli2,3, Omid Jamshidi Kandjani1
1Biotechnology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran.
Advanced pharmaceutical bulletin
|August 30, 2023
概括
这项研究介绍了一种重组DNA方法,用于生产特杜格卢提德,用于治疗短肠综合征 (SBS). 该方法成功地表达,净化并证实了teduglutide的功能和结构,用于潜在的大规模制造.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 药物开发 药物开发
背景情况:
- 短肠综合征 (SBS) 是一种吸收不良的疾病.
- 泰杜格卢提德是FDA批准的治疗SBS的药物.
- 有效的生产方法对于药物可获得性至关重要.
研究的目的:
- 开发一种重组DNA技术方法来生产泰杜格胺.
- 建立一个可扩展的方法来制造泰杜格卢.
主要方法:
- 克隆泰杜格卢提德基因进入具有因子XA裂部位的pGEX-2T载体.
- 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中过度表达GST-丁格化融合蛋白.
- 使用谷氨二糖亲和性染色学,柱上XA因子消化和尺寸排除染色学进行净化.
主要成果:
- 成功表达和净化了具有高结构完整性的teduglutide,通过循环二元化和质谱学证实了这一点.
- 通过体外测试证明了teduglutide的生物活性,显示了Caco2细胞增殖的显著诱导.
- 实现了主要的α-螺旋结构 (>50%) 产生的泰杜格卢提德.
结论:
- 开发的重组DNA技术方法使得特杜格卢的成功表达,净化和功能验证成为可能.
- 实验规模的方法适合适应试点规模和工业规模的泰杜格化物生产.
- 这项研究为有效和可扩展的Teduglutide用于SBS治疗的制造提供了基础.
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