重组哺乳动物蛋白质的单阶段非染色学净化,使用分裂蛋白质ELP标签系统
Sai Vivek Prabhala1, David W Wood2
1William G. Lowrie Department of Chemical and Biomolecular Engineering, The Ohio State University, Columbus, OH, USA.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|August 30, 2023
概括
这项研究引入了一种新的非染色学平台,用于净化糖蛋白治疗药物,利用类弹性类聚 (ELP) 和分裂整体. 这种方法使单步净化成为可能,大大减少了产量损失,提高了生物候选物的效率.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 生物制药制造业 生物制药制造业
背景情况:
- 葡萄糖蛋白疗法在现代医学中至关重要,但其工业规模的净化依赖于复杂的,多步骤的染色学过程.
- 目前的净化方法的开发具有挑战性,往往导致显著的产量损失,缺乏平台可扩展性.
- 现有的亲和度标签系统需要特定的树脂,并可能对蛋白质特征产生负面影响.
研究的目的:
- 评估一种新的非染色学平台,用于单步净化无标签的葡萄糖蛋白.
- 为了证明弹性样聚 (ELP) 和Npu DnaE分裂整蛋白融合系统的高通量选和净化功效.
- 为了获得高度净化的抗ErbB2 ML39单链可变片段 (scFv),表达在哺乳动物细胞中.
主要方法:
- 采用了融合蛋白系统,将弹性类似多 (ELP) 与自切割的Npu DnaE分裂整体结合起来.
- 在Expi293F悬浮细胞中表达的抗ErbB2 ML39单链可变片段 (scFv).
- 应用了基于ELP-素系统的单步,非色谱净化策略.
主要成果:
- 在单个净化步骤中获得高度净化的抗ErbB2 ML39 scFv.
- 证明了ELP-intein系统的潜力,作为一种用于糖蛋白净化的多功能平台技术.
- 成功产生无标签的葡萄糖蛋白,避免了亲和度标签的潜在干扰.
结论:
- 该ELP-intein融合系统提供了一个可行的,非染色学平台技术,用于高效的糖蛋白净化.
- 这种方法解决了生物制药制造的关键挑战,包括产量损失和过程开发时间.
- 展示的方法有助于高通量选和生物候选物质的净化,特别是糖蛋白.
