使用新构造 pGEX4T1/His-T1 的 T1 脂酶净化恢复的增强
Che Haznie Ayu Che Hussian1,2,3, Raja Noor Zaliha Raja Abd Rahman1,2,3, Adam Thean Chor Leow1,2,4
1Institute of Bioscience, Universiti Putra Malaysia, Serdang, Malaysia.
Preparative biochemistry & biotechnology
|August 30, 2023
概括
研究人员通过将GST标签替换为聚胺标签来提高热稳定T1脂酶的恢复产量. 这种增强的脂酶净化过程实现了超过98%的回收和工业应用的高特异性活性.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 酶工程是什么? 酶工程是什么?
- 蛋白质净化 蛋白质净化
背景情况:
- 泽利哈菌菌株T1产生的热稳定性脂酶具有工业潜力.
- 之前对GST-T1脂酶的净化仅使用两个染色学步骤 (亲和和离子交换) 恢复了33%.
研究的目的:
- 提高T1脂酶净化的回收率超过80%.
- 为工业应用开发更有效的净化策略.
主要方法:
- 将GST标签替换为T1脂酶的N端的聚胺标签.
- 利用位点导向的突变发生来引入XbaI限制位点来删除标签.
- 在大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS中表达了His-T1脂酶融合蛋白.
- 优化的单步净化使用Sepharose 6FF与5mM的伊米达.
主要成果:
- 在表达的蛋白质中达到236U/mg的脂酶特异性活性.
- 在单个净化步骤中获得98%的回收率.
- 达到了1353个单位/毫克的脂酶活性,净化增加了5.7倍.
- 特性His-T1脂酶:在pH5-9时稳定,在70°C时活性,在pH9时最佳活性.
结论:
- 聚胺标签策略显著提高了T1脂酶恢复和净化效率.
- 优化的单步净化方法适用于大规模的工业生产.
- 在各种工业应用中,His-T1脂酶表现出有利的稳定性和活性概况.


