开发,方法评估和应用基于细胞的TRF试验,用于分析ADCC活动

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物技术是生物技术.
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 抗体-Fc受体 (FcγR) 相互作用对于像抗体依赖细胞中介细胞毒性 (ADCC) 这样的效应器功能至关重要.
• 抗体的糖基工程,特别是Fc糖基化修改,可以通过影响受体结合来改变ADCC活性.
• 准确评估ADCC对于开发治疗性抗体和抗体-药物联合体 (ADCs) 至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种基于细胞的强大的时间解析光 (TRF) 试验,用于量化ADCC活性.
• 通过使用开发的测定来评估由Trastuzumab (anti-HER2) 和Trastuzumab emtansine (T-DM1) 触发的ADCC.
• 调查Fc糖化修饰对抗HER2ADCs的ADCC活性的影响.

主要方法:

• 一种新型的TRF测定,使用标记为2,2':6',2"-特皮里丁-6,6"-二碳酸 (TDA) 的SK-BR3点细胞和工程NK-92效应细胞.
• 用测试抗体化目标细胞,然后进行细胞溶解,将TDA释放到超级生物中.
• 在用欧 (Eu) 进行化后对TDA光的量化,以确定ADCC活性.

主要成果:

• 开发的TRF试验表现出良好的准确性,精度,线性和特异性.
• 来自TRF试验的结果与已建立的Luciferase释放试验有很强的一致性.
• 对糖基工程抗HER2ADCs的评估显示,Fc糖基化修饰对ADCC活性产生了不同程度的影响.

结论:

• 该TRF测定准确评估Trastuzumab和T-DM1.1诱导的ADCC活性.
• 这种方法适用于药物开发期间的其他治疗抗体,以选理想的ADCC活性.
• Fc糖化是影响治疗抗体和ADC疗效的关键因素.