开发pBACpAK捕获载体衍生物,以检测在抗氨基醇的细菌分离体内移动遗传元素的细胞内转移

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 抗微生物耐药性 (AMR) 通过横向基因转移 (HGT) 通过细菌种群传播.
• 移动遗传元素 (MGE) 是HGT和AMR传播的主要驱动因素.
• 现有的捕获载体,如pBACpAK,受到抗生素耐药性标记的限制,限制了它们在已经耐药的菌株中的使用.

研究的目的:

• 开发新的捕获载体,用于研究MGE在氨基醇耐药细菌中的细胞内转移.
• 为了克服pBACpAK载体在特定细菌分离物中的局限性.
• 验证用于跟踪细菌细胞内的MGE运动的新载体衍生物.

主要方法:

• 修改pBACpAK载体,通过替换氨基醇耐药性基因 (catA1) 用替代性耐药性基因:mcr-1 (pBACpAK-COL) 和 aph(3') -Ia (pBACpAK-KAN).
• 对工程塑体结构的验证.
• 埃舍里希亚大肠杆菌DH5α转合剂的转化,这些转合剂含有氨基醇耐药性等离子体pD25466与新的载体.
• 检测与pD25466等离子体相关的细胞内MGE运动.

主要成果:

• 成功开发并验证了pBACpAK-COL和pBACpAK-KAN向量.
• 证明了新载体在研究抗氨基醇耐药大肠杆菌中细胞内MGE转移的有用性.
• 证实了修改过的载体在具有先前耐药性的细菌菌株中发挥作用的能力.

结论:

• 扩展的pBACpAK载体套件为研究MGE细胞内转移提供了多功能工具.
• 这些新的载体有助于研究各种细菌分离物中复制物之间和复制物内部的MGE运动,包括具有不同抗菌素耐药性概况的细菌.
• 这项研究提高了研究AMR在临床相关细菌群体中传播的机制的能力.