一种简单,快速的基于光报告器的方法,用于检测子宫外重组酶表达在被认为是视网膜细胞类型向的小鼠系中
Sriganesh Ramachandra Rao1, Steven J Fliesler1
1Department of Ophthalmology, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, The State University of New York - University at Buffalo, Buffalo, NY, USA; Department of Biochemistry, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, The State University of New York - University at Buffalo, Buffalo, NY, USA; Neuroscience Graduate Program, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, The State University of New York - University at Buffalo, Buffalo, NY, USA; Research Service, VA Western New York Healthcare System, Buffalo, NY, USA.
Experimental eye research
|September 2, 2023
概括
本研究介绍了一种简单的ZsGreen报告员方法,用于检测小鼠线中意外的Cre复合酶活性. 这使得研究人员能够快速验证细胞特异性基因编辑,而无需动物痛苦或基因造型.
科学领域:
- 遗传学 遗传学 是一个
- 神经科学是一个神经科学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 特定于细胞类型的CRE复合酶小鼠线对条件基因淘汰至关重要.
- 宫外CRE表达 (泄漏) 可以损害这些小鼠线的完整性.
- 监测CRE活动对于验证基因编辑特异性至关重要.
研究的目的:
- 开发一种快速,廉价和无基因型的方法来检测异胎CRE复合酶表达.
- 评估视觉研究中常用的Cre线的特异性.
- 为验证Cre介导的基因编辑提供标准化的工作流.
主要方法:
- 使用了一个ZsGreen光记者系统.
- 开发了一个定制的3D蓝色LED灯箱用于可视化.
- 在视网膜色素表皮 (VMD2-Cre,RPE65-Cre),星球细胞 (GFAP-Cre) 和光受体双极原始细胞 (CRX-Cre) 特定的小鼠系中评估了Cre表达.
主要成果:
- ZsGreen的记者策略成功地在测试的小鼠线中识别出宫外CRE表达.
- 该方法允许快速,无基因型检测非特异性CRE活性.
- 在评估期间没有观察到动物的痛苦.
结论:
- 描述的ZsGreen报告员工作流提供了一个简单快速的方法来识别子宫外CRE复合酶表达.
- 这一策略适用于任何假定特定的Creo鼠线,确保实验有效性.
- 它消除了昂贵和耗时的基因型识别和老鼠线路的重新生成的需要.
