结合RNAscope和免疫组织化学,可视化神经元和微质中的炎症基因产物

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 分子生物学分子生物学
• 免疫组织化学 免疫组织化学
• 在现场混合化.

背景情况:

• 在中枢神经系统 (CNS) 组织中同时进行基因和蛋白质表达分析对于神经科学研究至关重要.
• 现有的方法难以进行代码检测和局部化,限制了对特定细胞类型的基因表达的理解.
• 由于抗体问题和可视化困难,对像中白素-1β (IL-1b) 和NLRP3这样的基因进行准确的测量,仅仅通过免疫组织化学 (IHC) 具有挑战性.

研究的目的:

• 在固定中枢神经系统组织中开发和优化光在位混合 (FISH) 和免疫组织化学 (IHC) 的同时可视化的协议.
• 为了使基因转录在特定细胞类型标记的群体内可靠量化.
• 通过量化IL-1b和NLRP3基因表达在脊髓损伤模型中的微质和神经元中应用该方法来研究神经炎症.

主要方法:

• 结合RNAscope FISH和IHC的新方案被开发用于同时检测14μm固定脊髓部分.
• 该方法使用RNAscope来标记基因转录 (IL-1b,NLRP3) 和IHC用于细胞类型特定抗原 (IBA1用于微质,NeuN用于神经元).
• 使用共聚焦显微镜和标准图像分析,在定义的细胞边界内量化标记的RNA转录.

主要成果:

• 开发的方法成功地允许在相同的中枢神经系统组织部分同时可视化和量化基因转录和蛋白质标记物.
• 在微质细胞和神经元中实现了对益炎性细胞因子IL-1b和炎症组分NLRP3的细胞类型特定量化.
• 这项研究首次描述了NLRP3和IL-1b在脊髓微质与慢性收缩损伤后神经元中的相对表达变化.

结论:

• 结合FISH-IHC协议为固定中枢神经系统组织的同时基因和蛋白质分析提供了强大的解决方案,克服了单个技术的局限性.
• 这种方法可以通过精确量化特定细胞类型内的基因表达来回答复杂的生物学问题.
• 优化的协议详细针对脊髓组织,最大限度地减少了准备时间和成本,并为神经炎症基因表达模式提供了新的见解.