基于密度的细胞条件介质的分化,以制备蛋白质学等级的细胞外囊泡
Quentin Roux1,2, Sarah Deville1,2, An Hendrix3,4
1Laboratory of Experimental Cancer Research, Department of Human Structure and Repair, Ghent University, Ghent, Belgium.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|September 4, 2023
概括
这项研究详细介绍了一种从细胞培养物中净化细胞外囊泡 (EV) 的方法. 该协议使用超离心和染色学来分离纯EV用于OMIC分析和生物标志物发现.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 对于细胞间通信至关重要.
- 使用像蛋白质组学这样的奥米克方法对EVs进行精确的分子分析至关重要.
- 目前的方法往往难以将电动汽车从污染生物流体中的非电动汽车组件中分离出来.
研究的目的:
- 提出一个强大的协议,用于净化细胞外囊泡 (EVs).
- 为了使完整的EV从细胞调节的介质中进行高特异性隔离.
- 为了促进下游的奥米克分析和生物标志物发现.
主要方法:
- 密度梯度超离心的连续实施.
- 尺寸排除色谱在EV净化中的应用.
- 从细胞调节的介质中准备EV.
主要成果:
- 在EV准备中实现了高特异性和可重复性.
- 恢复完整的净化EVs适合功能测试.
- 启用了对电动汽车的高效隔离,用于omics方法.
结论:
- 本协议提供了一种可靠的EV净化方法.
- 这种技术提高了下游分子分析的EV质量.
- 促进了基于EV的生物标志物发现和功能研究的进步.
