菌体显示衍生抗毒素抗体的开发和表征,中和Clostridioides difficile的TcdA和TcdB

科学领域:

• 免疫学和微生物学
• 生物技术和重组抗体工程 生物技术和重组抗体工程

背景情况:

• 艰难毒素A (TcdA) 和B (TcdB) 是C. difficile感染 (CDI) 的主要毒性因素.
• 中和这些毒素为CDI提供了一个可行的治疗策略.

研究的目的:

• 使用菌体显示来分离和描述针对C. difficile毒素TcdA和TcdB的单链可变片段 (scFv) 抗体.
• 评估这些scFvs在体外对毒素的中和能力,并评估它们作为CDI治疗剂的潜力.

主要方法:

• 用菌体显示技术选择了scFv片段,以原生和重组TcdA和TcdB为目标.
• 通过ELISA量化了选择的scFvs,并使用细胞活力试验评估了它们的中和活性.
• 用RT-qPCR分析IL-8和TNF-α的基因表达,并使用分子对接进行表位图绘制.

主要成果:

• 鉴定了18种scFv抗体 (7种抗TcdA,11种抗TcdB),其中5种克隆 (rA-C2,A-C9为TcdA;rB-B4,B-F5,B-F11为TcdB) 显示出显著的中和活性.
• 抗TcdA和抗TcdB scFvs的尾酒减少了Caco-2细胞中TNF-α和IL-8mRNA的表达.
• 分子对接表明scFvs主要与毒素的C端组合重复性寡 (CROP) 域相互作用.

结论:

• 菌体显示成功识别了对C. difficile毒素TcdA和TcdB的强效中和scFvs.
• 隔离的scFvs通过在体外中和毒素来证明CDI的治疗剂的潜力.
• 需要进一步的临床前和临床研究来验证这些scFvs对CDI治疗的治疗疗效.