从人类便中分离和净化细菌细胞外囊泡,使用密度梯度离心法
Yicong Xue1, Xixin Huang1, Zihao Ou1
1Department of Laboratory Medicine, Nanfang Hospital, Southern Medical University.
Journal of visualized experiments : JoVE
|September 7, 2023
概括
研究人员优化了利用密度梯度离心法从便中分离细菌细胞外囊泡 (BEVs) 的方法. 这种自上而下的方法提供了一种可靠的协议,用于净化这些关键的纳米微粒,以便进一步研究.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 纳米技术纳米技术
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 细菌细胞外囊泡 (BEVs) 是细胞间通信的关键媒介,转移生物活性分子.
- 来自肠道微生物群的BEVs影响胃肠道健康和全身生理学.
- 了解BEV分泌和功能需要强大的隔离和净化技术.
研究的目的:
- 优化从人类便中分离和净化细菌细胞外囊泡 (BEVs).
- 为了比较两个密度梯度离心 (DGC) 模式:上下和下向上.
- 建立一个可靠的BEV隔离协议,用于后续的多omics和功能分析.
主要方法:
- 两个DGC模式 (自上而下和自下而上) 为BEV隔离建立.
- 在分数6至8 (F6-F8) 中发现了BEV丰富.
- 评估包括粒子形态,大小,度,蛋白质含量和回收率.
主要成果:
- 顶向下DGC模式显示污染程度较低,恢复/纯度与底向上模式相比较.
- 经过7小时的离心,便中的BEV度达到10^8/mg.
- 优化的方法可以适应其他类型的体液.
结论:
- 开发的协议提供了一种标准化和可靠的方法来隔离和净化便BEVs.
- 这有助于对BEV进行多主题和功能研究的基础研究.
- 优化的DGC方法增强了对肠道微生物群与宿主相互作用的研究.
