通过两步免疫黄金方法对酸胺为冷TEM进行选择性标签
Na'ama Koifman1, Maayan Nir-Shapira1, Yeshayahu Talmon1
1Department of Chemical Engineering and the Russell Berrie Nanotechnology Institute, Technion-Israel Institute of Technology, Haifa 3200003, Israel.
Journal of structural biology
|September 7, 2023
概括
这项研究引入了一种简单的液相免疫黄金标记方法,以检测像酸素这样的负电荷脂. 该技术区分了膜类型,有助于理解细胞外囊泡 (EV) 脱落机制.
科学领域:
- 电子显微镜的电子显微镜
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 免疫黄金标签对于传输电子显微镜 (TEM) 中的抗原识别至关重要.
- 负电荷的脂,如酸,在细胞过程中起着至关重要的作用.
- 描述膜组成,特别是细胞外囊泡 (EVs),对于理解细胞通信和疾病至关重要.
研究的目的:
- 开发一种简单的液相协议,使用免疫黄金技术标记负电荷脂.
- 为了证明胺酸的标签方法的特异性和选择性.
- 将该技术应用于脂质体系统和细胞外囊泡 (EV),并与流细胞计相关联.
主要方法:
- 一个两步的标签过程,涉及生物化附件-V和黄金结合型链状维丁.
- 适用于由不同的脂质 (DOPC和DOPS) 组成的脂质体系统.
- 通过使用冷-TEM和流细胞计,分析刺激的THP1和MDA-468细胞的细胞外囊 (EV) 样本.
主要成果:
- 该协议特别标记了脂质体中负电荷的酸,使其与非负电荷的脂质体区分开来.
- 从刺激细胞系中分离出来的细胞外囊泡 (EVs) 上观察到特定的标记.
- 克里奥-TEM结果与对细胞及其EV标记上的Annexin-V标记的流细胞计分析有很好的相关性.
结论:
- 开发的immunogold标签技术提供了一种直接的方法来区分负电荷的膜.
- 这种技术提供了关于细胞外囊泡 (EV) 的组成及其潜在的脱落机制的见解.
- 该方法适用于模型系统 (脂质体) 和生物样本 (EV),增强了冷TEM分析.
