使用混合分泌信号和Intag正选择技术进行高通量IgG重编和表达

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 已建立的协议存在用于高通量IgG重格式化和表达使用体显示抗体片段.
• 当处理菌体库中的多种N终端序列时,现有的方法可能很繁,使PCR放大复杂化.
• 5'PCR初始剂结合部位是当前抗体重编格工作流程中的关键难点.

研究的目的:

• 为了克服高通量IgG重新格式化工作流程的局限性.
• 为了简化PCR放大步骤多种菌体库克隆.
• 为了使Fab片段能够高效地克隆成IgG表达载体.

主要方法:

• 研究了人体抗体VH1分泌信号的C端7氨基酸的替代.
• 利用细菌的ompA或pelB信号序列来创建混合信号序列.
• 测试了混合信号在驱动Expi293F细胞IgG表达中的有效性.

主要成果:

• 混合信号序列,将人类的VH1与细菌的ompA或pelB信号相结合,成功地驱动强烈的IgG表达.
• 混合信号的使用简化了放大和克隆过程.
• 针对细菌分泌信号的单个5'PCR初始剂足以克隆Fab片段.

结论:

• 混合分泌信号为IgG重新格式化工作流提供了显著的简化.
• 这种方法极大地简化了菌体显示的Fab片段的转化为可表达的IgG.
• 简化的工作流提高了抗体工程和表达的效率.