高通量DNA测序对单域抗体发现和工程的应用

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 下一代测序 (NGS) 允许对抗体库进行深入的调查.
• 仅重链抗体 (HCAbs) 或单域抗体 (sdAbs) 由于其独特的结构,非常适合NGS.
• 目前用于抗体库分析的方法正在通过高通量测序得到改进.

研究的目的:

• 使用Illumina MiSeq.提供简单快速的协议,用于生产和测序来自不同来源的免疫球蛋白可变域,使用Illumina MiSeq.
• 证明NGS在单域抗体 (sdAb) 发现和工程中的实用性.
• 为sdAb开发提供NGS的多种应用,包括图书馆分析,表位特异性确定,B细胞选择和亲和力成熟.

主要方法:

• 开发用于免疫球蛋白可变域 (V_HH,V_H,V_L) 的多重安普利康图书馆制备协议.
• 应用Illumina MiSeq平台用于抗体可变域的高通量测序.
• 整合NGS与体外显示技术,如菌体显示和磁珠选择,用于抗体工程.

主要成果:

• 建立了具有成本效益和设备轻度的协议,用于生成和测序sdAb amplicon库.
• 证明了NGS的成功应用,用于评估菌体显示的sdAb库多样性和监控泛图.
• 展示了基于NGS的表位特异性sdAbs和抗原特异性B细胞的识别,以及亲和力成熟策略.

结论:

• 提出的NGS协议为sdAb发现和工程提供了一种强大而易于使用的方法.
• 这些方法显著扩大了用于抗体开发的体外显示技术的实用性.
• 可适应的协议可以应用于各种蛋白质类型和库,促进更广泛的生物技术应用.