图像化毛细管异电聚焦并列高分辨率质谱学使用纳米电喷射电离 (ESI) 进行蛋白质异质性特征
Teresa Kwok1, She Lin Chan1, Matthew Courtney1
1Advanced Electrophoresis Solutions Ltd., Cambridge, Canada.
一种新的纳米电子喷雾电离 (nano-ESI) 方法直接将成像的毛细血管同电聚焦 (icIEF) 与高分辨率质谱 (HRMS) 结合起来. 这种icIEF-HRMS技术增强了生物治疗电荷异质性分析,以提高药物质量.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 重组单克隆抗体 (mAbs) 是重要的生物治疗药物.
- 评估电荷异质性对于mAb的安全性,有效性和功效至关重要.
- 现有的方法,如成像毛细管异电聚焦 (icIEF),可以得到改进.
研究的目的:
- 开发和评估icIEF与高分辨率质谱学 (HRMS) 的直接合,使用纳米电子喷雾电离 (nano-ESI).
- 改进生物治疗中蛋白质电荷异质性的分析.
- 评估新的icIEF-HRMS系统的灵敏度,可重复性和线性.
主要方法:
- 构建一个纳米-ESI装置直接 icIEF 到 HRMS 合.
- 使用NISTmAb,复杂的mAbs,双特异性抗体和融合蛋白来评估系统.
- 开发方法的灵敏度,可重复性 (RSD) 和线性 (R值) 的评估.
主要成果:
- 该ICIEF-HRMS系统表现出与NISTmAb在0.25毫克/毫升的良好灵敏度.
- 在1mg/ml下观察到良好的重复性 (7.58%和8.01%的RSD用于化时间和MS强度).
- 在各种度中证实了强烈的线性 (R=0.9983),复杂的样本显示出高的多功能性.
结论:
- 开发的icIEF-HRMS提供了对影响蛋白质电荷异质性的结构变化的全面了解.
- 纳米-ESI合显著提高了相对于传统ESI的灵敏度,同时保持了良好的重复性和吞吐量.
- 界面易于使用,兼容商业HRMS仪器,为生物治疗特征提供了多功能工具.
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