隔离和成像的一种协议,用于从哺乳动物细胞培养物中分离和成像大型细胞外囊泡或中体残留物
Sungjin Park1, Smit A Patel1, Elizabeth E Torr1
1Department of Genetics, University of Wisconsin, Madison, WI 53706, USA.
STAR protocols
|September 10, 2023
概括
这项研究引入了一种具有成本效益的方法,用于从细胞培养中分离中体残留物 (MBR) 和细胞外囊泡 (EV),使用聚乙烯糖醇 (PEG) 或PEG涂层黄金纳米颗粒,取代超离心.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物技术是生物技术.
- 纳米技术 纳米技术
背景情况:
- 中体残留物 (MBR) 和细胞外囊泡 (EV) 在细胞过程中至关重要.
- 传统的隔离方法,如超离心,是昂贵和耗时的.
研究的目的:
- 从哺乳动物细胞培养基中分离MBR和大型EV的有效和负担得起的协议.
- 为MBR和EV隔离提供超离心的替代方案.
主要方法:
- 使用1.5%的聚乙烯甘醇6000 (PEG6000) 进行沉.
- 采用PEG5000涂层的金纳米颗粒用于沉.
- 描述了细胞培养,媒介收集和沉步骤.
- 使用免疫光抗体染色和成像进行详细的MBR表征.
主要成果:
- 使用PEG和PEG涂层黄金纳米粒子成功分离了MBR和大型EV.
- 证明了用于MBR/EV隔离的超离心的可行替代方案.
- 通过免疫光学来表征孤立的MBRs.
结论:
- 开发的协议为MBR和EV隔离提供了更容易获得和更经济的方法.
- 这种方法有助于进一步研究MBR和EV的生物学作用.
