有效的DNA敲进使用AAV介导的交付与2细胞胚胎CRISPR-Cas9电穿孔
Daniel J Davis1, James F McNew2, Hailey Maresca-Fichter3
1Department of Veterinary Pathobiology, University of Missouri, Columbia, MO, United States.
Frontiers in genome editing
|September 11, 2023
概括
这项研究提出了一个高效的管道,用于生成使用CRISPR-Cas基因组编辑的转基因敲入小鼠和大鼠模型. 新方法在老鼠中达到90%以上的效率,在小鼠中达到50%以上的效率.
科学领域:
- 遗传学和基因组学 遗传学和基因组学
- 分子生物学分子生物学
- 动物模型 动物模型
背景情况:
- 基因组编辑的进步使得基因改造动物模型的有效生成成为可能.
- 现有的创建敲门模型的方法可以改进,以提高效率和更广泛的应用.
研究的目的:
- 开发一条高效的管道,用于生产模拟老鼠和老鼠模型.
- 结合多种先进的技术,以获得卓越的基因组编辑结果.
主要方法:
- 采用了一种管道,该管道结合了阿诺关联病毒 (AAV) 介导的DNA输送,单链DNA供体模板,二细胞胚胎修饰和CRISPR-Cas核糖核蛋白 (RNP) 电穿孔.
- 应用了该技术,以生成具有Cre或Flp重组酶序列的敲入大鼠模型.
- 用Cre重组酶向插入生成的敲进小鼠模型.
主要成果:
- 在大鼠模型中,为Cre或Flp重组酶序列实现了超过90%的敲进效率.
- 在小鼠模型中证明了CRE复合酶的超过50%的敲进效率.
- 直接比较效率优于其他常用的方法.
结论:
- 经过修改的AAV介导的DNA输送与2细胞胚胎CRISPR-Cas9 RNP电穿孔管道是非常有效的产生敲进小鼠和老鼠模型.
- 这种方法显著提高了为研究创建转基因动物模型的效率.
