在本地感染环境中,eINTACT 方法用于研究受细菌效应体准的宿主植物细胞中的核变化
Yuan You1,2, Zhihao Jiang3
1Department of Molecular Life Sciences, Technical University of Munich, Freising, Germany. yuan.you@nickels.de.
Nature protocols
|September 11, 2023
概括
这项研究引入了标记在特定细胞类型 (eINTACT) 中的核的效应器诱导性隔离,这是一种新的方法来隔离细菌效应器向的植物细胞核. 这种技术使得在被格拉姆阴性细菌感染期间,可以对宿主细胞反应进行详细分析.
科学领域:
- 植物病理学 植物病理学
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 第三类效应蛋白是gram负细菌用来操纵宿主细胞的关键毒性因子.
- 从受感染的组织中分离效应器向的植物细胞是具有挑战性的,因为它们的代表性不足和嵌入性质.
研究的目的:
- 描述一种新的协议,即对标记在特定细胞类型 (eINTACT) 中的核的效应器诱导隔离,用于将核与细菌效应器准的植物细胞隔离.
- 为了能够对宿主植物中因作用因子引起的细胞和核变化进行有针对性的研究.
主要方法:
- 在eINTACT方法中,使用了标有生物素的核和涂有斯特雷普塔维丁的磁珠来进行基于亲和力的净化.
- 该协议涉及生成eINTACT转基因线和兼容的细菌突变.
- 在受感染的植物组织中,从受效细胞中净化细胞核.
主要成果:
- eINTACT成功地将高质量的细胞核从细菌效应器向的宿主细胞中分离出来,在它们的原生感染环境中.
- 净化核的差分分析揭示了效应因子依赖的核变化.
- 整个感染实验和核隔离过程可以分别在5天和4小时内完成.
结论:
- eINTACT是一种独特且可适应的方法,用于研究宿主植物中各种グラム阴性细菌的III型因子.
- 这种技术克服了分离特定细胞类型以研究细菌与宿主相互作用的挑战.
- eINTACT有助于更深入地了解植物感染中的效应器功能和宿主反应.
