逐步的基因改造,以有效地表达Aspergillus nidulans中的异质蛋白质

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 状真菌,如阿斯伯吉勒斯尼杜兰,由于它们的分泌能力,对蛋白质生产有价值.
• 然而,低蛋白质分泌能力限制了它们作为细胞工厂用于异质蛋白质表达的使用.
• 增强分泌对于优化工业应用至关重要.

研究的目的:

• 为了提高阿斯伯吉路斯尼杜兰斯的蛋白质分泌能力.
• 开发一种高性能底盘,用于高效的异质蛋白质生产.
• 为了优化治疗性蛋白质的表达.

主要方法:

• 修改了蛋白质分泌途径,以减少通过内分泌网膜相关蛋白质降解 (ERAD) 和真空孔的降解.
• 通过消除聚合,改变了细胞形态.
• 使用增强的绿色光蛋白 (eGFP) 作为记者,并表达人间白蛋白-6 (HuIL-6).
• 破坏细胞外蛋白酶以进一步增加产量.

主要成果:

• 通过减少蛋白质降解,显著增强了EGFP分泌.
• 通过消除菌根聚合,实现了1.5倍和1.3倍的eGFP分泌量增加.
• 成功获得人体白内素-6 (HuIL-6) 的高分泌表达.
• 通过细胞外蛋白酶破坏增加HuIL-6产量.

结论:

• 减少异质蛋白降解和防止菌根聚合是增强蛋白质表达的有效策略.
• 一个高性能底盘主体,△agsB-derA,被开发为高效的异质蛋白分泌表达.
• 在工程化A. nidulans宿主中证明了HuIL-6的有效表达,为真菌生物合成建立了一个有前途的平台.