通过选转录调节器的高吞吐量和库来提高微生物爆炸物传感器菌株的性能
Lidor David1, Etai Shpigel2, Itay Levin1
1Enzymit Ltd. 3 Pinhas Sapir St., Ness Ziona 7403626, Israel.
Computational and structural biotechnology journal
|September 13, 2023
概括
我们开发了一种高通量选方法,使用细菌细胞和GFP光来改进检测爆炸物的转录因子. 这种增强的YhaJ蛋白显著提高了2,4-丁托检测系统的灵敏度和速度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 微生物学 微生物学
背景情况:
- 转录因子对于调节基因表达至关重要,可以用于生物传感应用.
- 提高像LysR型调节器YhaJ这样的转录因子的性能对于开发敏感爆炸物检测系统至关重要.
- 现有的转录因子修改定向进化方法受到选效率的限制.
研究的目的:
- 开发和应用高通量选 (HTS) 方法来提高转录因子的性能.
- 为改造大肠杆菌YhaJ转录因子,以提高对2,4-丁二 (DNT) 的检测.
- 为了创建一个更灵敏,更快速的细菌爆炸物传感器.
主要方法:
- 构建了一个 *yhaJ* 变体的聚焦和库 (约. 6.4 x 10^7 的变种).
- 光激活细胞分类 (FACS) 用于对超过70%的序列空间进行高通量选.
- 选择的YhaJ突变体被集成到基于生物发光的DNT检测系统中.
主要成果:
- 鉴定了具有对DNT增强光反应的YhaJ突变.
- 最好的DNT记者菌株显示出7倍低的检测值.
- 工程应变显示信号强度增加了45倍,响应时间减少了40%.
结论:
- 基于FACS的HTS方法对于快速选大型转录因子库是有效的.
- 设计的YhaJ变种显著提高了细菌DNT检测系统的性能.
- 这种方法有可能增强其他生物传感和催化生物反应.
关键词:
生物发光是一种生物发光.生物转运者是生物转运者.埃舍里希亚大肠杆菌 (Escherichia coli) 是一个大肠杆菌.高通量屏幕 (HTS) 是指高通量屏幕.地雷是一种地雷.国家储备系统 (NGS)精密变种图书馆 精密变种图书馆蛋白质工程是一种蛋白质工程.全细胞生物传感器更多相关视频
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