全基因组CRISPR查策略,以识别导致SARS-CoV-2升和VSV-G介导入境的基因
Md Saddam Hossain1,2, Jason G Kerkvliet1,2, Adam D Hoppe1,2
1Department of Chemistry and Biochemistry, South Dakota State University, Brookings, South Dakota, USA.
Journal of medical virology
|September 14, 2023
概括
这项研究引入了一种新的CRISPR查方法,以精确识别涉及病毒入境的宿主因素,特别是SARS-CoV-2和VSV-G,克服了以前方法的局限性.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 识别细胞宿主因素对于开发抗病毒疗法至关重要.
- 克里斯普尔屏幕是发现宿主因子的强大工具,但往往缺乏病毒进入的特异性.
- 现有的方法难以区分进入特定基因与参与后期病毒复制阶段的基因.
研究的目的:
- 开发一种新的CRISPR查策略,精确识别介导病毒进入的宿主因素.
- 为了区分特定于严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 尖端和囊性口腔炎病毒糖蛋白 (VSV-G) 介导入口的基因.
- 通过绕过病毒复制步骤来增强特异性.
主要方法:
- 开发了一种CRISPR全基因组屏幕和反屏幕策略,使用表现出SARS-CoV-2尖峰和VSV-G.的隐形病毒表现出 SARS-CoV-2尖峰和VSV-G.
- 使用Cre-Gag融合蛋白绕过lentiviral反转录和集成,直接激活一个记者.
- 用于SARS-CoV-2和VSV-G入口的伪病毒来识别特定的宿主因素.
主要成果:
- 成功识别了已知的SARS-CoV-2的受体ACE2和VSV-G的LDL受体.
- 参与病毒进入的基因与影响lentiviral reporter表达的基因差异化.
- 克雷-加格融合/流报告员系统显著提高了病毒入口相关宿主因子的特异性.
- 经过验证的命中证实了包裹特定因素和记者表达基因之间的区别.
结论:
- 开发的伪病毒CRISPR屏幕和对屏幕策略精确地识别了介导病毒进入的宿主因素.
- 与传统的活病毒查相比,这种方法提供了更高的特异性,减少了混因素.
- 提供了一种有价值的新方法,用于发现对特定病毒进入步骤至关重要的宿主机制,帮助抗病毒开发.
