配体的化学乙化和两步消化协议,以减少在亲和度净化-质谱中的代码消化
David M Hollenstein1,2, Margarita Maurer-Granofszky3, Wolfgang Reiter2
1Department for Biochemistry and Cell Biology, University of Vienna, Center for Molecular Biology, Vienna Biocenter Campus (VBC), Dr. Bohr-Gasse 9, Vienna 1030, Austria.
Journal of proteome research
|September 15, 2023
概括
我们开发了一种简单的化学处理,以防止在亲和力净化质谱学过程中防止珠子结合的连接体消化. 这种方法通过减少干扰来提高蛋白质识别的灵敏度和准确性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 亲和性净化质谱 (AP-MS) 对于识别蛋白质相互作用至关重要.
- 蛋白酶对珠结合的连接体 (如抗体) 的编码复杂化下游分析.
- 污染的配体可以降低AP-MS的灵敏度和定量准确性.
研究的目的:
- 开发一种有效,快速和易于使用的方法,以减少AP-MS中珠结合联体的代消化.
- 提高AP-MS实验的灵敏度和定量准确度.
主要方法:
- 使用硫酸-NHS-乙酸盐,在珠结合的配体 (抗体,斯特雷普塔维丁) 上化学化氨酸残留物.
- 珠子的预化,使联体对Lys-C蛋白酶产生抗性.
- 两步消化方案:在珠子上的Lys-C消化,然后在溶液中的素消化.
主要成果:
- 在AP-MS中成功减少污染的配体.
- 配体 (抗体,链状维丁) 变得对lys-C介导的蛋白质溶解不敏感.
- 能够对更大的样本量进行分析,提高LC-MS的灵敏度和定量准确度.
结论:
- 硫-NHS-乙酸盐预化方法有效地减少了连接体共消化.
- 这种方法使用无毒化学品和温和的反应条件.
- 该协议提高了AP-MS研究的可靠性和范围.
关键词:
美国GFP的GFP是GFP.硫-NHS-乙酸盐的使用情况亲缘关系净化净化化学乙化是一种化学的化.免疫净化 免疫净化 免疫净化连接器 连接器 连接器质谱测量质谱测量质谱测量质谱测量质量测量质谱测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量质量测量纳米体是一个纳米体.蛋白质组学 蛋白质组学在Streptavidin中使用.更多相关视频
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