实践研究注射条件在渐变化模式下对治疗性蛋白质分析的影响,当使用非常短的列时
Raquel Pérez-Robles1, Szabolcs Fekete2, Natalia Navas3
1Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada (ibs.GRANADA), Granada, Spain; Department of Analytical Chemistry, Science Faculty, University of Granada, Granada, Spain; Fundación para la Investigación Biosanitaria de Andalucía Oriental-Alejandro Otero, Granada, Spain.
对于超短的RPLC和IEX列来说,当分离诸如治疗性蛋白质等大分子时,可以进行大体积注射. 然而,HILIC柱需要最小的注入量,以防止峰值扭曲和突破效应.
科学领域:
- 染色体学 染色体学 是一种染色学.
- 分析化学 分析化学
- 生物制药学分析
背景情况:
- 优化样品注射量对于色谱分离效率至关重要.
- 超短列在速度和溶剂消耗方面具有优势,但在注射体积耐受性方面存在独特的挑战.
- 大分子,如治疗性蛋白质,通常需要特定的染色学条件进行有效的分析.
研究的目的:
- 系统地研究注射样本体积对超短列的分离效率的影响.
- 为了确定不同色谱模式 (RPLC,IEX,HILIC) 对大分子的注射体积容忍度.
- 为了评估质量负荷对各种化机制的分离质量的影响.
主要方法:
- 对注射样本体积对表面效率的影响进行系统研究.
- 使用超短列 (L <50毫米) 用于逆相液态染色学 (RPLC),离子交换染色学 (IEX) 和水友相互作用液态染色学 (HILIC).
- 研究了大分子,特别是治疗性蛋白质,并分析了质量负荷的影响.
主要成果:
- 在治疗性蛋白质的超短RPLC和IEX列上可以容忍大量注射量,而不会影响分离质量.
- 对RPLC和IEX的有利行为归因于开启关闭的化机制和水样稀释剂作为最弱的溶剂.
- 超短的HILIC柱对大量注射量表现出不良耐受性,导致由于溶剂不匹配而导致峰值分裂和突破.
结论:
- 超短的RPLC和IEX列适用于大量注射大分子,如治疗性蛋白质.
- 为了保持分离完整性,HILIC染色学需要在超短列上进行非常低的注射量.
- IEX柱显示了最高的质量负载承受能力,容纳高达10%的样品和吸附剂质量,而不会影响分离质量.
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