胚胎心肌细胞和细胞增殖试验的隔离使用基因工程记者鼠标模型
Maren C Beall1, Deqiang Li1,2, Jihyun Jang1,2
1Center for Cardiovascular Research, Abigail Wexner Research Institute, Nationwide Children's Hospital, Columbus, OH, USA.
Bio-protocol
|September 18, 2023
概括
这项研究提出了一种精细的方法来隔离胚胎心肌细胞,使用一种新的记者小鼠模型. 这种技术提高了研究心肌细胞增殖和生长因子对心脏发育的影响的准确性.
科学领域:
- 心血管生物学 心血管生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 先天性心脏病 (CHD) 与肌性缺陷有关,而心肌细胞在发育过程中的生长依赖于诸如胰岛素样生长因子2 (IGF-2) 这样的因素.
- 研究胚胎心肌细胞增殖对于理解心脏发育至关重要,但目前的隔离协议缺乏用于准确细胞识别的特定记者.
- 现有的心肌细胞隔离方法需要优化,以改善细胞增殖的可视化和跟踪.
研究的目的:
- 开发和验证一个优化的协议,以隔离和培养胚胎心肌细胞.
- 使用心肌细胞特异性报告系统,以增强体外心肌细胞增殖的可视化.
- 提高对心肌细胞生长和生长因子作用的机制研究的准确性和可重复性.
主要方法:
- 从一种新的Tnnt2促进器驱动的H2B-GFP敲入小鼠模型 (TNNT2) 中分离和培养胚胎心肌细胞.
- 使用H2B-GFP报告员进行核标记心肌细胞特异光的体外可视化.
- 使用基3 (p-H3) 试验来追踪和量化细胞增殖.
主要成果:
- 该协议使用H2B-GFP报告员系统成功分离和识别胚胎心肌细胞.
- 遗传记者和p-H3测定的组合允许准确计数和跟踪增殖心肌细胞.
- 这种精细的方法提高了机理学研究中细胞识别和增殖评估的精度.
结论:
- 这种优化的协议为研究胚胎心肌细胞增殖提供了一个强大的工具.
- 使用H2B-GFP/+小鼠和p-H3试验显著提高了心肌细胞增殖研究的准确性.
- 该方法在研究生长因子和其他外部线索在心脏发育和先天性心脏病中的作用方面具有广泛的应用.
