一个可行的协议,用UHPLC-MS/MS方法,结合代用矩阵,对来自老鼠的干血斑中胆汁酸进行分析

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 临床诊断 临床诊断 临床诊断

背景情况:

• 干血斑点 (DBS) 采样提供了方便的血液采集,但由于样本体积较小和过纸的复杂性,对分析内源代谢物如胆酸 (BAs) 提出了挑战.
• 在DBS中准确地对BA进行分析对于理解代谢障碍和开发诊断生物标志物至关重要.
• 现有的分析方法难以达到在DBS中进行全面的BA分析所需的灵敏度和特异性.

研究的目的:

• 开发和验证一种可靠的分析方法,用于在干血斑 (DBS) 中分析和量化35种胆酸 (BAs).
• 优化样品预处理和UHPLC-MS/MS条件,以便从DBS中有效提取和敏感检测BA.
• 为准确的BA量化建立一个合适的DBS替代矩阵,并评估在临床前模型中的方法性能.

主要方法:

• 开发了一种两步溶剂添加方法 (水跟着甲醇) 来有效地从DBS中提取BA.
• 优化快速超高性能液体色谱与双重质谱学 (UHPLC-MS/MS) 结合,用于高分辨率分离和敏感检测BA.
• 使用BSA溶液中的老鼠红细胞创建了一个DBS代用矩阵,用于信号抑制/增强和并行性评估.

主要成果:

• 在DBS中成功地分析和量化了35种不同的胆酸,具有良好的分辨率,精度和准确性.
• 优化的两步提取方法在DBS中证明了多个BA的高效率.
• 开发的DBS替代矩阵在信号抑制/增强和并行性评估方面表现良好.
• 该协议成功地应用于DBS中的BAs,从肝脏内胆固醇模型和健康的对照大鼠中,具有良好的重复性.

结论:

• 这项研究提出了第一个有效地分析和量化干血斑点中的35种胆酸的方案.
• 开发的UHPLC-MS/MS方法和DBS替代矩阵为涉及BA分析的临床前研究提供了可靠的工具.
• 这种方法对未来在使用DBS样本发现生物标志物和疾病监测方面的应用具有重大潜力.