建立一种高效的基于电穿孔的方法来操纵阿克索洛特大脑中的目标基因表达
Sulei Fu1,2, Cheng Peng1,2, Yan-Yun Zeng3
1Key Laboratory of Brain, Cognition and Education Science, Ministry of Education, Institute for Brain Research and Rehabilitation, Guangdong Key Laboratory of Mental Health and Cognitive Science, South China Normal University, Guangzhou, China.
Cell transplantation
|September 19, 2023
概括
研究人员开发了一种电穿孔方法,用于在轴突大脑的末端质细胞 (EGC) 中进行基因操纵. 过度表达Cdc42破坏了细胞极性,并延迟了大脑的再生,而Tenascin-C敲击是有效的.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 发展生物学 发展生物学
- 再生医学是一种再生医学.
背景情况:
- 青 (Ambystoma mexicanum) 展现出显著的大脑再生能力.
- 了解阿克索洛特大脑再生的基因机制需要高效的基因操纵工具.
研究的目的:
- 建立和优化一种快速,高效的基于电穿孔的方法,用于在轴突大脑内附带性质细胞 (EGCs) 中进行基因功能增益和功能丧失研究.
- 使用这种新方法,研究Cdc42在轴突大脑再生中的作用.
主要方法:
- 在axolotl telencephalon EGC中开发和优化了针对向基因过度表达或淘汰/淘汰的电穿孔.
- 通过电极定位实现了EGFP表达在特定心室区域的空间控制.
- 在EGC中利用电穿孔过度表达Cdc42并击倒Tenascin-C (TnC),随后发生脑损伤.
主要成果:
- 在EGC中Cdc42的过度表达破坏了顶极极性 (ZO-1标记物的损失) 并损害了新神经元的迁移,导致大脑再生的延迟.
- 对CRISPR-Cas9/gRNA复合体的电穿孔导致了针对EGC的mRNA和蛋白质水平上TnC的高效淘汰.
- 在不同的心室区域中证明基因操纵的空间特异性.
结论:
- 建立了一种通用且高效的电穿孔技术,用于对阿克索洛特 EGC 的基因操纵,从而促进了功能研究.
- 在脑再生过程中,Cdc42在维持EGC极性和正确的神经元迁移方面发挥着至关重要的作用.
- 开发的方法提供了一个强大的平台,用于剖析axolotl大脑再生中的基因功能.
