优化多重免疫光染色用于表征瘤免疫微环境
Ryan Cohen1, Tracey Lee-Pullen2, Timothy J Miller2
1School of Biomedical Sciences, The University of Western Australia, Perth, Western Australia; Colorectal Cancer Unit, St John of God Subiaco Hospital, Perth, Western, Australia.
Methods (San Diego, Calif.)
|September 23, 2023
概括
这项研究优化了五色多重免疫光面板用于结直肠癌研究. 该方法准确地描述了T细胞种群及其在瘤微环境中的空间分布.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 在瘤学瘤学.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 瘤微环境 (TME) 对于理解宿主瘤相互作用和抗瘤免疫反应至关重要.
- 在TME中的免疫生物标志物优于传统的分期来预测结直肠癌复发.
- 多重复合免疫光学 (mIF) 允许在瘤组织内详细的免疫细胞分类和空间表征.
研究的目的:
- 优化一个自动化的,五色多重体免疫光面板,用于特征T细胞种群在结肠直肠癌.
- 为了验证基于胺信号放大 (TSA) 的mIF用于翻译研究的使用.
- 在结直肠腺癌组织分析中建立一个可重复的mIF工作流.
主要方法:
- 开发一个基于TSA的五色mIF面板,使用抗体对抗CD3,CD8,CD103和细胞激素.
- 优化自动化幻灯片染色,包括初级抗体定位和单体测试开发.
- 详细的抗体剥离,角过氧化酶抑制,染色序列的确定和光体分配的协议.
- 使用标准光显微镜幻灯片扫描仪的图像采集和光谱交叉声的管理.
- 数字图像分析用于细胞表征和空间分布评估在TME.
主要成果:
- 成功优化了针对结直肠癌的自动化五色mIF面板.
- 对T细胞群体 (CD3+,CD8+,CD103+) 的可复制染色和表征的证明.
- 建立一个工作流程,使瘤微环境中的免疫细胞能够进行空间分析.
结论:
- 带有TSA的自动化mIF提供了一种一致,经济有效和准确的方法来分析结直肠癌中的免疫细胞.
- 这种优化的面板和工作流便于详细地描述TME的空间特征,这对于理解抗瘤免疫力至关重要.
- 描述的方法支持翻译研究,使研究人员能够使用标准设备使用mIF.
