针对在小鼠胚胎上使用氧化介导的自光减少进行全挂RNA光 in situ 杂交的优化协议
Angela Morabito1, Jonas Malkmus1, Anna Pancho1
1Developmental Genetics, Department of Biomedicine, University of Basel, 4058 Basel, Switzerland.
STAR protocols
|September 24, 2023
概括
这项研究引入了一种新的协议,以减少组织自光,以改善RNA和蛋白质分析. 该方法可以在没有数字后处理的情况下在小鼠胚胎中增强光现场杂交 (FISH) 成像.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 发育生物学 发展生物学
背景情况:
- 组织自光复杂化基于光的分子分析.
- 现有的方法往往需要大量的数字图像处理来减轻自光.
研究的目的:
- 开发一个协议,以减少整个安装组织的自光.
- 使用光技术实现RNA和蛋白质分析的清晰成像.
主要方法:
- 协议结合了氧化介导的自光减少和基于洗剂的透.
- 应用于小鼠胚胎肢体芽的整体RNA光在位杂交 (FISH).
- 包括胚胎采集,固定,光化学漂白,透,RNA-FISH和光学清除.
主要成果:
- 成功降低了组织自身光.
- 启用了清晰的RNA-FISH和免疫光成像.
- 消除了需要数字图像后处理来去除自发光的需要.
结论:
- 开发的协议有效地减少了生物样本中的自光.
- 这种方法显著提高了基于光的分子成像的质量.
- 该协议具有多功能性,适用于各种组织和脊椎动物胚胎.
