滴滴数字PCR的首次应用,用于检测贝中的Toxoplasma gondii

科学领域:

• 食物传播的动物传染病是动物传播的疾病.
• 寄生虫学的寄生虫学
• 分子诊断学 分子诊断学

背景情况:

• 毒素菌是由*Toxoplasma gondii*引起的毒素菌,是全球重要的食物传播动物性疾病.
• 海洋动物,特别是像贝这样的软体动物,可以集中和传播T. gondii卵,对人类健康构成风险.
• 现有的检测方法可能缺乏对海鲜中的寄生虫DNA度较低所需的灵敏度.

研究的目的:

• 开发和验证一种高度灵敏的数字滴滴聚合酶连锁反应 (ddPCR) 协议,用于检测和量化鱼 (*Mytilus galloprovincialis*) 中的*Toxoplasma gondii* DNA.
• 通过使用经过验证的ddPCR方法,评估来自那不勒斯湾的贝中T. gondii的流行率.
• 为了将ddPCR与实时PCR的性能进行比较,用于在贝中检测T. gondii.

主要方法:

• 一个敏感的ddPCR协议被调整并使用已知度的T. gondii*参考DNA被入鱼池中进行验证.
• 从80个尖贝池 (阳性和阴性对照) 和从那不勒斯湾收集的100个现场收集的贝池中提取了DNA.
• 评估了ddPCR分析的灵敏度,特异性和效率,并与实时PCR进行了比较.

主要成果:

• 该ddPCR协议显示100%的灵敏度和特异性,检测T. gondii*DNA到8个基因组拷贝/μL.
• 在实地采集的100个贝池中,16%的贝池使用ddPCR检测出T. gondii的阳性.
• 实时PCR未能在任何现场采集的样本中检测到T. gondii,这突显了ddPCR的优越灵敏度.

结论:

• 经过验证的ddPCR协议是一种高度敏感和特定的工具,用于检测贝中低度的T. gondii* DNA.
• 这种方法可以显著帮助监测海产品的安全性,并降低人类毒素菌的风险.
• 这些发现强调了ddPCR等分子方法在食品安全监督计划中的重要性.