人体生长激素:补充DNA克隆和细菌中的表达

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 人体生长激素 (hGH) 在生长和新陈代谢中起着至关重要的作用.
• 了解hGH的遗传基础对于研究其调节和潜在的治疗应用至关重要.
• 之前对不同物种生长激素序列的研究表明了进化关系.

研究的目的:

• 克隆和表征人类生长激素信使RNA (mRNA) 的互补DNA (cDNA) 序列.
• 为了预测人类生长激素的信号序列.
• 研究人类生长激素与相关基因之间的进化关系.
• 开发一种方法,在大肠杆菌中高水平地表达人类生长激素.

主要方法:

• 克隆人类生长激素的mRNA衍生的cDNA.
• 克隆cDNA的核酸测序.
• 生物信息分析用于预测蛋白质序列和进化关系.
• 人体生长激素序列的基因融合与大肠杆菌的trp D基因.
• 在trp操作的控制下,大肠杆菌中融合基因的表达.

主要成果:

• 克隆的cDNA包含5'未翻译区域 (29个核酸),前激素的编码序列 (651个核酸) 和3'未翻译区域 (108个核酸).
• 预测了人类生长激素的信号序列.
• 对比序列分析支持了对hGH,大鼠生长激素和人类胆管体内母细胞激素的基因复制进化的假设.
• 一种融合蛋白质,包括70%的人类生长激素序列,在高水平 (约. 3%的细菌蛋白质) 在大肠杆菌中.
• 融合蛋白与抗hGH抗体表现出特异反应性,并且在大肠杆菌中稳定.

结论:

• 这项研究成功地克隆和测序了人类生长激素的全长cDNA.
• 预测的信号序列为hGH处理提供了新的见解.
• 这些发现加强了生长激素和相关激素基因之间的进化联系.
• 在大肠杆菌中建立了一个强大的生产生物相关的人类生长激素融合蛋白的系统,在研究和生物技术中具有潜在的应用.