在恒常状态和炎症条件下,从结肠组织中分离上皮细胞和肠道细胞

科学领域:

• 胃肠道生物学 胃肠道生物学
• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 炎症性肠病 (IBD) 是一个重大挑战,因为缺乏预防疗法和次优治疗方法.
• 了解肠道损伤和再生的分子机制对于开发新的治疗策略至关重要.
• 单细胞RNA测序 (sc-RNA) 提供了对细胞状态和疾病中信号通路的强大洞察力,但需要高质量的细胞隔离.

研究的目的:

• 开发和验证可靠的协议,同时从炎症结肠组织中分离高质量的上皮细胞和树皮细胞.
• 为解决肠道单细胞转录组分析细胞分离技术当前的局限性.
• 为研究胃肠道疾病中的组织适应和不适应提供资源.

主要方法:

• 从小鼠和人类结肠组织中分离上皮细胞和树皮细胞的两个协议的开发.
• 在酸 (DSS) 诱导的大肠炎的小鼠模型中测试协议.
• 对人类克罗恩病患者活检的协议的应用.
• 执行sc-RNA测序分析以评估细胞类型的保存.
• 评估协议适用于免疫光染色和流细胞计的适用性.

主要成果:

• 开发的协议成功地将上皮细胞和树皮细胞区分离出炎症的结肠组织.
• sc-RNA测序证实了大多数本地结肠上皮细胞和树皮细胞类型的保存.
• 这些协议即使在组织中表现出因炎症而损害细胞活力的情况下也有效.
• 隔离方法与各种细胞系的下游免疫光和流细胞计分析兼容.

结论:

• 优化的协议使可从炎症结肠组织中高产量分离活跃的上皮细胞和肌层细胞.
• 这些协议支持在肠道炎症和疾病模型中进行全面的转录和细胞分析.
• 这种资源有助于对肠道损伤和再生的细胞和分子基础进行更深入的研究.