基因编码的光探测器用于检测血诱导的细胞染色体c的形状变化

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物物理学的生物物理.

背景情况:

• 细胞染色体c (Cytc) 对于细胞能量代谢和亡至关重要.
• 细胞细胞激活涉及血结合和与细胞染色体c血酶 (CCHL) 的相互作用.
• 现有的研究Cytc结构的方法缺乏生理相关性和时空分辨率.

研究的目的:

• 开发一种基因编码的光方法,用于监测活细胞中的Cytc形状变化.
• 阐明血红素诱导的Cytc折叠的机制及其与CCHL的相互作用.

主要方法:

• 基因编码的Förster共振能量转移 (FRET) 使用Cerulean和Venus光蛋白合到Cytc.
• 监测FRET振幅以区分未折叠,中间和本地Cytc状态.
• 在活细胞中测量血红素和CCHL联合表达时的Cytc形状变化.

主要成果:

• 仅仅血红蛋白结合就会诱导部分折叠的Cytc状态,由FRET信号转移证明.
• 高血红度和CCHL联合表达促进了本地Cytc结构的恢复.
• 在没有血红素的情况下,Cytc与CCHL的关联性很弱.

结论:

• 一种基于FRET的方法成功阐明了由血红素诱导的Cytc形状变化与时空分辨率.
• 这种方法为Cytc折叠机制和体内相互作用提供了洞察力.
• 开发的技术适用于研究活细胞中Cytc与小分子和其他蛋白质的相互作用.