基于PCR的替代方法用于生成Komagataella phaffii菌株
Anastasiya Makeeva1, Dmitry Muzaev1, Maria Shubert1
1Laboratory of Biochemical Genetics, Department of Genetics and Biotechnology, Saint Petersburg State University (SPBU), Saint Petersburg 199034, Russia.
Microorganisms
|September 28, 2023
概括
这项研究提出了基于PCR的新方法,用于设计Komagataella phaffii (Pichia pastoris) 酵母菌株,以提高重组蛋白质的生产. 这些技术简化了带有多个表达盒的菌株的创建,提高了效率,而不需要新的载体.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 微生物工程 微生物工程
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 科马加泰拉 (Pichia pastoris) 是一种主要的酵母宿主,用于生产重组蛋白质.
- 改善K. phaffii中异质蛋白质合成对于生物技术应用至关重要.
- 产生具有多个表达卡塞特和MutS表型的菌株可以提高蛋白质产量.
研究的目的:
- 开发和展示基于PCR的新型方法,以扩大K. phaffii.中的ppicz载体的实用性.
- 为了实现快速标记器交换和构建多副本表达系统.
- 用改进的K. phaffii菌株促进高效的重组蛋白质生产.
主要方法:
- 利用PCR放大用于pPICZ载体中的快速可选择标记物交换.
- 采用PCR放大与分裂标记介导转换相结合,用于开发K. phaffii MutS菌株与双表达盒.
- 应用了这些基于PCR的方法来有效地生产Neo-2/15,一种互白素-2模仿剂.
主要成果:
- 使用基于PCR的程序,证明了可选择标记物的快速交换成功.
- 通过PCR和分裂标记转换成功生成了K. phaffii MutS菌株,通过pPICZ载体通过PCR和分裂标记转换提供了两个表达盒.
- 使用开发的菌株工程技术,在K. phaffii中实现了Neo-2/15蛋白的高效生产.
结论:
- 描述的基于PCR的技术为生成和增强K. phaffii表达菌株提供了有效的替代方案.
- 这些方法通过避免需要新的载体或广泛的克隆来简化菌株的发展.
- 改进的菌株工程方法有助于在K. phaffii.中实现更有效的重组蛋白质合成.
