净化和功能验证LtCas12a蛋白质的使用情况
Bo Zhou1, Ye Chen2, Lifang Li2
1Department of Gynecological Oncology, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430062, Hubei, China; Women and Children's Hospital Affiliated to Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430062, Hubei, China.
STAR protocols
|September 28, 2023
概括
这项研究详细介绍了生成LtCas12a蛋白的协议,该蛋白识别了特定的TTNA原空间器相邻的基因序列. 该方法包括细菌转化,蛋白质净化和验证CRISPR应用的裂变活动.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 这就是CRISPR技术.
背景情况:
- Cas12a酶是基因组编辑中的一个多功能工具.
- 为了扩展CRISPR应用,需要Cas12a的新型变体,具有改变的原体空间器相邻动机 (PAM) 识别.
- 该LtCas12a变体提供了独特的PAM识别功能.
研究的目的:
- 为生成和净化LtCas12a蛋白提供详细的协议.
- 描述验证LtCas12a.a的酶活性的方法.
- 为了使研究人员能够利用LtCas12a进行精确的基因组工程.
主要方法:
- 细菌细胞的转化和收获.
- 使用亲和染色学和透析净化蛋白质.
- 通过cis-和trans-cleavage测试验证LtCas12a活性.
主要成果:
- 建立了一个强大的生产功能性LtCas12a蛋白质的协议.
- 生成的LtCas12a显示了特定的DNA裂变活性.
- 该协议确保了用于实验的LtCas12a酶的纯度和活性.
结论:
- 提出的协议有助于生产和验证LtCas12a.
- LtCas12a扩大了基于Cas12a的基因组编辑系统的准范围.
- 这项工作支持推进基于CRISPR的研究和治疗开发.
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