估计人类化学诱导多能干细胞衍生小岛中的残留未分化的细胞,使用 lncRNA 作为生物标志物
Yandan Wu1, Zhenzhen Zhang1, Shuangshuang Wu1
1Hangzhou Reprogenix Bioscience Co., Ltd, Hangzhou, 310023, China.
Scientific reports
|September 30, 2023
概括
检测残留的未差异化人类化学诱导多能干细胞 (hCiPSCs) 对糖尿病治疗安全至关重要. 使用长非编码RNA生物标记物的新分析准确地量化了这些细胞在衍生小岛细胞中.
科学领域:
- 干细胞生物学 干细胞生物学
- 糖尿病研究 糖尿病研究
- 分子诊断学 分子诊断学
背景情况:
- 人类多能干细胞 (hPSCs) 提供了产生胰岛素生成β细胞的潜力,用于糖尿病治疗.
- 一个关键的安全问题是残留的未分化hPSCs的存在,这些hPSCs可以形成瘤.
- 人类化学诱导的多能干细胞 (hCiPSCs) 是一种无转基因且可能更安全的替代品.
研究的目的:
- 开发一种高度敏感的试验,用于检测衍生小岛细胞中的残留未分化hCiPSCs.
- 识别和验证特定的RNA生物标记物,用于量化未分化的hCiPSCs.
- 确保hCiPSC衍生小岛细胞的安全性和质量,用于糖尿病治疗的临床应用.
主要方法:
- 与小岛细胞相比,RNA测序 (RNA-seq) 用于识别hCiPSC中独特的蛋白质编码和非编码RNA转录.
- 候选生物标志物使用逆转录定量PCR (RT-qPCR) 和数字滴滴PCR (ddPCR) 进行了验证.
- 长非编码RNAs (lncRNAs) 被优先考虑为生物标记物,因为它们的性能优于蛋白质编码RNAs.
主要成果:
- 特定的lncRNA标记物 (LNCPRESS2,LINC00678,LOC105370482) 被确定并验证.
- ddPCR测定显示出高灵敏度,能够检测到每106个小岛细胞中只有1-3个hCiPSC.
- 开发的方法可以在小岛细胞群中量化低至0.0001%的未分化细胞.
结论:
- 已经建立了一个敏感和特定的ddPCR测定,针对hCiPSC特定的lncRNAs.
- 这种测试有效量化了残留的未分化hCiPSCs,解决了糖尿病细胞治疗的关键安全问题.
- 该方法确保了hCiPSC衍生小岛细胞的质量和安全性,以实现潜在的临床转化.
