用流式成像显微镜确定T细胞的奥斯莫斯特性,与电感应区分析相比
Alexandra Roesch1, Roland Windisch2, Christian Wichmann2
1Coriolis Pharma, Fraunhoferstr. 18 b, 82152, Martinsried, Germany; Leiden Academic Centre for Drug Research (LACDR), Leiden University, PO Box 9502, 2300, RA, Leiden, the Netherlands.
Cryobiology
|October 2, 2023
概括
流成像显微镜 (FIM) 准确地测量T细胞的透反应和膜透性对冷保护剂 (CPAs),这对于开发有效的细胞冷保存方法至关重要.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 低温生物学 低温生物学
背景情况:
- 开发基于细胞的药品的冷保存方法需要了解细胞对冷保护剂 (CPA) 的透反应.
- 精确的细胞参数对于优化CPA负载和确保解后的细胞活力至关重要.
研究的目的:
- 用流影像显微镜 (FIM) 作为一种新的细胞大小测量技术来评估T细胞的透反应.
- 确定关键的冷保存参数,包括透性不活性细胞体积 (Vb) 和膜对水的透性和CPAs.
- 为了将FIM发现与传统的Coulter计量器测量进行比较.
主要方法:
- 主要T细胞的模型Jurkat细胞受到透挑战.
- 使用FIM和电阻 (Coulter计数器) 来测量细胞体积变化.
- 与FIM一起使用Trypan蓝色染色来区分活细胞和死细胞,以准确估计Vb.
- 在不同温度下测量了膜对水的透性,二甲基硫氧化物 (Me2SO) 和糖醇的透性.
主要成果:
- 与Coulter计量器测量相比,使用Trypan蓝色的FIM提供了更准确的Vb估计.
- 甲基二硫氧化物 (Me2SO) 透到朱尔卡特细胞的速度快于甘油.
- 在Arrhenius行为之后,CPA透率随着温度的增加而下降.
- 在CPAs的存在下,膜对水的透性下降.
- 尤卡特细胞的透性无活细胞体积 (Vb) 是同位体体积的49%,与初级T细胞相比.
结论:
- 流成像显微镜 (FIM) 是确定哺乳动物细胞膜对水和CPAs的透性参数的宝贵工具.
- 使用FIM准确地确定细胞参数,可以为CPA加载协议的合理设计提供信息,以改善冷保存.
- 这些发现有助于推进基于细胞的治疗方法的冷保存技术.
