在大肠杆菌中高效表达和净化无标签的复合人体前素 (hPCT),具有精确的序列
Masataka Nakagawa1, Yui Tomioka1, Teruo Akuta1
1Research and Development Division, Kyokuto Pharmaceutical Industrial Co., Ltd., 3333-26, Aza-Asayama, Kamitezuna Takahagi-shi, Ibaraki, 318-0004, Japan.
Protein expression and purification
|October 4, 2023
概括
我们开发了一种新方法,在大肠杆菌中高效地生产高度纯净的复合人体公素 (hPCT). 这个过程产生了适用于诊断校准器的无标签hPCT,克服了小稳定性的挑战.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质生物化学 蛋白质生物化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 再组合的人类公素 (hPCT) 对于免疫测试至关重要.
- 在大肠杆菌中hPCT的高效和纯的表达存在挑战,原因是宿主蛋白酶的潜在降解.
- 精确的N端和C端序列对于功能性重组蛋白质至关重要.
研究的目的:
- 开发一种高效的方法来表达和净化大肠杆菌中复合人体前素 (hPCT).
- 为了确保最终产品中精确的N端和C端氨基酸序列.
- 为了获得高纯度,无标签的hPCT,适用于作为免疫测试中的校准器.
主要方法:
- 编码子优化的hPCTcDNA与eXact和丁结合域 (CBD) 标签的融合.
- 两步亲和染色学:Profinity eXact亲和,然后是基亲和染色学.
- 通过蛋白酶裂变 (eXact标签) 和整蛋白自我裂变 (CBD标签) 进行标签去除.
- 污染物去除使用胺酸硫酸盐,Triton X-114和硫酸盐.
主要成果:
- 在没有标签的重组hPCT中达到>95%的纯度.
- 成功移除了大肠杆菌宿主DNA和内毒素.
- 该方法有效地保护小基免受蛋白质酶降解.
- 净化后的hPCT适合作为校准器用于前素和素免疫试验.
结论:
- 提出的方法为生产高纯度重组hPCT提供了强大的和高效的策略.
- 这种方法确保了精确的N-和C-终端序列,并克服了重组蛋白表达的常见挑战.
- 由此产生的高纯度hPCT是用于诊断应用的有价值的试剂,特别是在免疫测试中.
