变压器基编辑器在哺乳动物细胞和小鼠中的设计和应用

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 基因编辑技术的技术
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 基因编辑技术 - - 基因编辑技术 - - 将细胞因素脱氨酶与催化受损的Cas蛋白结合起来,用于向基因替代.
• 现有的基编辑系统中的非目标突变引发了治疗用途的安全问题.
• 变压器基编辑器 (tBE) 以前是为了实现高效的编辑而没有可检测的目标外突变而开发的.

研究的目的:

• 为变压器基编辑器 (tBE) 的设计和应用提供详细的协议.
• 为了使研究人员能够实施高精度的基础编辑,并提高安全性.
• 为了促进tBE在哺乳动物细胞和体内小鼠模型中的使用.

主要方法:

• 单导向RNA (sgRNA) 和辅助sgRNA对的设计.
• 构建tBE载体和产生腺相关病毒 (AAV).
• 全基因组和全转录组的目标外突变分析.
• 在体内向小鼠输送AAV并检查编辑效果.

主要成果:

• 该协议详细介绍了tBE应用的完整工作流程,从设计到体内分析.
• tBE在哺乳动物细胞和小鼠中展示了高精度的基准编辑,没有可观察到的目标外突变.
• 整个过程可以在细胞中2-3周内完成,在小鼠中6-8周内完成.

结论:

• 变压基编辑器 (tBE) 代表了基因编辑的重大进步,提供了高效率和安全性.
• 该协议为研究人员提供了一份全面的指南,帮助研究人员利用tBE进行精确的基础编辑应用.
• 由于其最小化的非目标效应,tBE对未来的治疗策略具有前景.