[制备HSV-IgM人类-小鼠嵌合抗体,并开发稳定的重组细胞系]
Yamin Cui1, Xiaoping Tian1, Jingjing Sun1
1Zhengzhou Immuno Bio-Tech Co., Ltd., Zhengzhou 450016, Henan, China.
Sheng wu gong cheng xue bao = Chinese journal of biotechnology
|October 8, 2023
概括
通过优化细胞系查和在CHO-S细胞中的表达,实现了HSV1和HSV2IgM抗体的大规模生产. 这有助于开发用于简单疹病毒IgM检测的质量控制试剂.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 针对特定抗体的大规模体外生产对于诊断和治疗至关重要.
- 简单疹病毒 (HSV) 的IgM抗体是重要的诊断标志物.
- 需要对像IgM这样的复杂抗体同型进行有效的表达系统.
研究的目的:
- 建立一个可扩展的体外生产方法,用于人类-小鼠仿真HSV1-IgM和HSV2-IgM抗体.
- 优化细胞线查和表达条件,以产生高位数IgM抗体.
- 为了净化和确认重组IgM抗体的生物活性.
主要方法:
- 采集混合瘤细胞基因序列,使用RNA酶介导的cDNA末端快速放大 (RLM-RACE).
- 将仿真抗体基因克隆成真核细胞表达载体,以便在CHO-S细胞中表达.
- 优化稳定细胞线选,包括用于池建设和单克隆选的压力条件.
- 使用蛋白L亲和染色学和生物活性测试进行净化.
主要成果:
- 成功克隆并表达了人类-小鼠仿真HSV1-IgM和HSV2-IgM抗体.
- 确定了最佳选压力:20P200M (第一阶段) 和50P1000M (第二阶段).
- 获得的最终标位为HSV1-IgM的1620 mg/L和HSV2-IgM的623 mg/L.
- 纯化的重组IgM抗体 (HSV1: 899 kDa,HSV2: 909 kDa) 显示出生物活性.
结论:
- 该研究提出了一种有效的策略,用于高位数IgM亚型抗体的有效体外表达.
- 这种方法促进了对HSV1和HSV2IgM复合抗体的质量控制产品的开发.
- 优化的过程有可能用于可扩展的其他IgM抗体的生产.
