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Updated: Jul 14, 2025
10:09
In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development
Published on: June 16, 2022
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基于电穿孔的Easi-CRISPR产生了EGFP-HiBiT磁带在永生卵管上皮细胞中的双插入
Lingkang Liu1, Jinyu Wei2, Chen Chen3
1College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530004, China; Guangxi Zhuang Autonomous Region Engineering Research Center of Veterinary Biologics, Nanning 530004, China; Guangxi Key Laboratory of Animal Reproduction, Breeding and Disease Control, Nanning 530004, China.
Poultry science
|October 8, 2023
概括
研究人员将卵管上皮细胞 (cOEC) 永久化,并使用Easi-CRISPR基因编辑来实现高效的EGFP-HiBiT敲进. 这为鸟类生物反应器和基因编辑鸟类建立了一个有价值的体外模型.
科学领域:
- 动物生物技术动物生物技术
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子遗传学 分子遗传学
背景情况:
- 产卵母作为繁殖的模型和潜在的生物反应器通过基因编辑在卵蛋白 (OVA) 基因的制药生产.
- 目前对卵管上皮细胞 (cOECs) 的研究受限于没有永久化的细胞系.
- 在细胞中,传统的CRISPR-HDR敲门效率低于最佳,通常在1%-10%之间.
研究的目的:
- 为基因编辑应用建立一个不朽的卵管上皮细胞 (cOEC) 模型.
- 使用基于电穿孔的Easi-CRISPR方法,优化COEC中的基因编辑效率.
- 为开发鸟类生物反应器和基因编辑鸟类创建一个平台.
主要方法:
- 通过使用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT) 来分离和永久化初级coECs.
- 采用基于电穿孔的Easi-CRISPR策略,将EGFP-HiBiT磁带敲入肉OVA位点.
- 用基因型和DNA测序来确认敲进效率和双插入.
主要成果:
- 已建立的不朽化cOECs保持了稳定的增殖,正常的型和卵管上皮细胞表型.
- 通过Easi-CRISPR方法,在单个电穿孔回合中实现了高EGFP-HiBiT敲入效率27.9%.
- 成功生成了两种单细胞克隆,具有双的EGFP-HiBiT插入.
结论:
- 开发的不朽化cOECs为的基因编辑提供了一个强大的体外模型.
- 基于电穿孔的Easi-CRISPR策略提高了基因编辑效率,促进了鸟类生物反应器和基因编辑鸟类的创建.
