基于MAR的CMV/AAT促销者在人类肝细胞中增强了转基因表达

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 基因治疗 基因治疗
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 以前开发了一种利用矩阵附着区域 (MARs) 在哺乳动物细胞中进行插件等离子体复制的非病毒性插件载体.
• 需要组织特异性病变载体来改善向基因传递和表达.

研究的目的:

• 通过结合特定的cis-acting元素,开发一种替代的,肝脏特异的剧发性载体.
• 为了评估转基因表达的效率,在肝细胞中使用复合CMV/AAT促进剂.

主要方法:

• 构建基于MAR的以不同促进剂和增强剂元素为基础的环状载体.
• 使用工程载体感染HepG2,Huh-7和HL-7702肝细胞.
• 使用光强度和流细胞计量,量化增强的绿色光蛋白 (eGFP) 表达.

主要成果:

• 阿尔法-1-抗素 (AAT) 促进体在肝细胞系中显示出最高的eGFP表达.
• 将hCMV增强剂与AAT促进剂结合起来,显著提高了eGFP表达和HepG2细胞中eGFP阳性细胞的百分比.
• 与对照组相比,在特定的复合促进剂组中,eGFP蛋白水平增加了多达5.1倍.

结论:

• 复合的CMV/AAT促进体对肝细胞内的基于MAR的病变载体中高水平的转基因表达是有效的.
• 这种工程载体系统有可能成为治疗肝脏疾病的基因转移工具.
• 观察到的增强可能与SRF,REL和CREB1.1等特定转录因子的活性有关.