完全无人监督的在线蛋白质消化和LC-MS片映射
Jason Richardson1, Zhongqi Zhang1
1Process Development, Amgen Inc., One Amgen Center Drive, Thousand Oaks, California 91320, United States.
Analytical chemistry
|October 10, 2023
概括
一种新的蛋白质消化和LC-MS图的自动化在线方法简化了初级结构特征. 这种技术将文物最小化,并使用最小的样本材料进行高效分析.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分析化学 分析化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 基于液体染色学和质谱学 (LC-MS) 的基映射是蛋白质主要结构确定标准.
- 手动的蛋白质溶解消化是耗时且劳动密集的.
- 现有的自动离线方法可以引入由于延长消化或存储时间的文物.
研究的目的:
- 开发一种完全自动化的在线方法,用于蛋白质消化和LC-MS基映射.
- 将消化和LC-MS分析集成到单个HPLC系统中,减少用户干预.
- 为了最大限度地减少样本工件,提高蛋白质表征的效率.
主要方法:
- 在Agilent 1290 Infinity II LC系统上实现自动化在线消化系统.
- 化,二硫化物减少,囊氨基化,缓冲区交换和三性消化的整合.
- 消化模块与LC-MS/MS直接合,可立即进行分析.
主要成果:
- 已证明对单克隆抗体和其他蛋白质的高消化效率.
- 与手动消化相比,在较少的文物中获得了强大和可重复的结果.
- 展示了最小的样本消耗,大多数消化的蛋白质接受LC-MS分析.
结论:
- 开发的自动在线消化系统为蛋白质初级结构特征提供了一种高效,强大和最小化文物方法.
- 这种方法显著减少了LC-MS图的实践时间和样本要求.
- 该系统允许快速,按需的消化和分析,提高了蛋白质组学工作流程的效率.
